细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:
1、电镜下观察自噬体的形成
2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬发生
3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值大小可估计自噬水平的高低。
4、检测长寿蛋白的批量降解(非特异)
5、MDC染色:包" />
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细胞自噬检测

医学实验主要包括分子生物学、细胞生物学、病理学、免疫学的实验;SCI论文主要包括论文翻译、母语润色改写;专利主要包括发明专利、实用新型专利、外观设计专利的申请;专著主要包括单篇学术论文、系列学术论文和学术专著的出版。

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细胞自噬主要有三种形式:微自噬(microautophagy)、巨自噬(macroautophagy)和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA)。
细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:
1、电镜下观察自噬体的形成
2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬发生
3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值大小可估计自噬水平的高低。
4、检测长寿蛋白的批量降解(非特异)
5、MDC染色:包

细胞自噬检测

细胞自噬主要有三种形式:微自噬(microautophagy)、巨自噬(macroautophagy)和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA)。
细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:
1、电镜下观察自噬体的形成
2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬发生
3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值大小可估计自噬水平的高低。
4、检测长寿蛋白的批量降解(非特异)
5、MDC染色:包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。
6、CellTrackerTM Green染色:主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。
在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位:
Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。
LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示所有酸性液泡。
pDsRed2-mito:载体,转染后表达一个融合蛋白(红色荧光蛋白+线粒体基质定位信号),可用来检测线粒体被自噬掉的程度(Mitophagy)。
MitoTraker探针:特异性显示活的线粒体,荧光在经过固定后还能保留。
Hsp60:定位与线粒体基质,细胞死亡时不会被释放。
Calreticulin(钙网织蛋白):内质网腔

 
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